"Dr. No" nació en un momento peculiar de la saga; Fleming la escribió como una novela de recuperación, tanto para Bond como para él mismo. El Agente 007 quedó al borde de la muerte al final de "Desde Rusia con amor", y Fleming necesitaba una historia que lo devolviera a la acción de forma gradual, enviándolo a una misión aparentemente sencilla antes de enfrentarlo a una amenaza mayor. Jamaica, la isla que Fleming amaba profundamente y donde escribía cada invierno en su residencia Golden Eye, volvió a ser el escenario natural de esa transición. La novela también respondió a las críticas que Fleming había recibido de algunos sectores por el tono demasiado realista de sus entregas anteriores. Entonces con "Dr. No" decidió abrazar abiertamente lo espectacular, lo excesivo y lo casi fantástico, sentando las bases del estilo que definiría la franquicia cinematográfica durante décadas.
Doctor Julius No — El antagonista principal. Recluso siniestro con pinzas mecánicas en lugar de manos y una fascinación sádica por el dolor, controla la isla de Crab Key desde un lujoso complejo subterráneo y usa tecnología de radio para desviar misiles americanos en beneficio de los soviéticos. Es el primer gran villano megalómano de la saga y el molde de todos los que vendrían después.
Honeychile Rider — La compañera femenina de Bond en esta novela. Bella, salvaje e independiente, vive en la isla de Crab Key recogiendo conchas cuando Bond la encuentra en la playa. Su icónica aparición emergiendo del mar se convertiría en una de las imágenes más reproducidas de toda la franquicia.
Quarrel — Pescador jamaicano y aliado de Bond, personaje ya presente en "Vive y deja morir". Guía y acompaña a 007 en la travesía secreta hacia Crab Key, pagando con su vida el enfrentamiento con las fuerzas del Doctor No.
Strangways — Jefe de la estación del MI6 en Jamaica cuya misteriosa desaparición es el detonante de toda la misión. Su muerte, narrada en las páginas de apertura, marca el tono oscuro de la novela desde el inicio.
M — Jefe del MI6 que envía a Bond a Jamaica creyendo que se trata de un caso menor, sin sospechar la magnitud de la amenaza que se oculta detrás.
Smith — Jefe de la sección colonial en Kingston y aliado de Bond sobre el terreno en Jamaica, quien le proporciona información crucial sobre el Doctor No y la isla de Crab Key antes de la expedición.
Miss Moneypenny — Secretaria de M en el cuartel general del MI6, presente en la apertura de la novela en Londres con su característico intercambio con Bond.